99%的宫颈癌是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的。目前已经发现200多种HPV，其中一些与不同程度的癌症风险相关，使诊断和治疗变得复杂。在Elsevier出版的“分子诊断学杂志”的一篇报道描述了一种新的“二合一”诊断方法，该方法不仅可以检测HPV感染的类型，还可以指示癌前标记物。该测试可以提高诊断风险最高形式的HPV感染的能力，以低成本提供快速结果，并帮助避免不必要的诊断程序。

　　“我们开发了HPV  

RNA-Seq，一种新型的体外分子诊断程序，用于检测高危HPV感染，并鉴定高级别鳞状上皮内病变(HSIL，这是宫颈癌的一个癌前期变化)患者。HPV  

RNA-Seq是一项独特的测试，结合了分子检测(HPV分型)和宫颈细胞学(细胞表型分析)的优势，”巴斯德研究所的Marc Eloit博士说。

　　宫颈癌筛查可以在癌症发生前检测和治疗癌前病变。目前，筛查要么侧重于检测HPV，要么通过细胞学鉴定异常宫颈细胞。然而，检测病毒的DNA或RNA的分子诊断试验在识别癌症或癌前病变方面效果不佳。使用巴氏试验对宫颈细胞进行分析，即使与高风险HPV的分子检测相结合，也会导致大量不必要的阴道镜检查——这是一种侵入性检查，医生通过该检查可视地检查宫颈病变。

　　在这项概念验证研究中，HPV  

RNA-Seq用于分析来自55名患者的样本，28名患有低度鳞状上皮内病变(LSIL)和27名患有癌前HSIL的患者。

　　HPV RNA-Seq能够检测和确定16个高危hpv患者的hpv感染类型，其结果与广泛使用和官方批准的HPV DNA分子诊断试剂盒相当。事实上，HPV  

RNA-Seq检测到的hpv阳性患者比dna检测多2例，并且还发现了更多患有多种HPV感染的患者。

　　发现该试验具有97.3%的敏感性(检测HPV存在的能力)和93.8%的阴性预测值(NPV，没有HPV的可能性)。Eloit教授指出：“高效宫颈癌筛查需要对高风险HPV感染具有高敏感性和NPV，因为HPV检测阴性的女性通常在几年后才再次接受检测。”

　　细胞学被用作对HPV患者进行分类的快速方法，而组织学被认为是宫颈癌诊断的金标准。然而，组织学分析更具侵入性，需要更多时间才能产生结果。为了确定新的测试是否在宫颈癌分类中占有一席之地，研究人员还将细胞学与HPV  

RNA-Seq进行了比较，并发现了高级细胞学的标记，这鼓励了HPV RNA-Seq作为分类检测的诊断性能。他们还发现HPV  

RNA-Seq与组织学的阳性预测值(PPV，HPV感染的可能性)总是大于细胞学与组织学的PPV。“与细胞学相比，这一观察结果有利于HPV  

RNA-Seq可能增加的医学价值，”Eloit教授评论道。

　　Eloit教授建议在某些患者中使用HPV RNA-Seq可以帮助消除不必要的阴道镜检查。

　　他还预测，技术将允许多个样本同时运行，从而将每次测试的成本降低到10到20美元。该测试也可适用于其他HPV相关癌症，例如肛门癌和头颈癌。

　　HPV RNA-Seq基于多重逆转录PCR(RT-PCR)和下一代测序(NGS)的双重组合。  

RT-PCR是一种测量少量RNA(即反映HPV基因活性的遗传物质)的敏感方法，NGS可以精确表征扩增的病毒序列的多样性。这样可以检测一个样品中多达16种高风险或假定的高风险HPV以及癌前标记物的存在。

　　“我们的方法遵循目前用于分子诊断的NGS扩增板的发展趋势，同时保持适应传统的分子检测格式。这种灵活性可以使HPV  

RNA-Seq成为许多实验室的一种方便、可靠且经济实惠的解决方案，”主要作者、巴斯德研究所的Philippe Pérot博士补充说。